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干细胞储存的过程是怎样的?

干细胞储存的过程一般包括采集、运输、检测、处理、储存等环节,以下是具体介绍:

1采集

脐带、胎盘羊膜干细胞采集:在新生儿娩出后,待脐带结扎剪断后,对脐带、胎盘进行无菌处理,将其放入专门的采集容器中,采集其中的间充质干细胞等。

外周血干细胞采集:供体先注射动员剂,促使骨髓中的干细胞释放到外周血中。然后通过血细胞分离机,从供体的外周静脉中采集含有干细胞的血液,一般采集量为几十毫升到几百毫升不等。

骨髓干细胞采集:在手术室中,供体在全麻或局部麻醉下,医生使用骨髓穿刺针从髂骨等部位抽取骨髓,一般采集量为 50-200 毫升。

2运输

专业运输箱:采集后的干细胞样本会被放入含有特定保存液的采集容器中,并置于专业的干细胞运输箱内。运输箱具有温度控制和监测功能,能使样本在运输过程中保持在合适的温度范围,一般为 2-8℃。

冷链运输:运输过程严格遵循冷链运输的要求,确保干细胞样本在运输途中的温度稳定,同时配备实时温度监测设备和记录系统,保证样本的质量和活性不受影响。

3处理

分离和纯化:运用密度梯度离心、免疫磁珠分选或者其他组织提取技术,将干细胞从采集的样本中分离出来,并去除杂质细胞,提高干细胞的纯度。

细胞培养和扩增:对于一些采集量较少或需要特定功能的干细胞,可在符合 GMP 标准的实验室中,使用专用的细胞培养基,在适宜的培养条件下对干细胞进行培养,使其增殖和扩增,以获得足够数量的干细胞。

添加冷冻保护剂:在干细胞储存前,向干细胞悬液中加入适量的冷冻保护剂,如二甲基亚砜(DMSO),能够降低细胞内冰晶的形成,保护干细胞在冷冻过程中免受损伤。

4)质量控制

细胞数量和活性检测:运用细胞计数仪等设备,对干细胞样本中的细胞数量进行准确计数,并通过台盼蓝染色、AO/PI染色等方法检测干细胞的活性,确保活性细胞比例达到一定标准。

微生物检测:采用细菌培养、真菌培养等方法,检测样本中是否存在细菌、真菌等微生物污染,保证干细胞的安全性。

免疫检测和基因检测:通过免疫组化、流式细胞术等手段,对干细胞的免疫表型进行分析,确定干细胞的类型和纯度。同时进行基因检测,排查是否存在基因突变、遗传疾病等问题。

5)储存

程控降温:将处理好的干细胞样本放入冻存管中,然后置于程控降温仪中,按照设定的降温程序,以一定的降温速率缓慢降低温度,使干细胞逐渐进入休眠状态。

液氮储存:经过程控降温后的干细胞样本,被转移至液氮罐中进行长期储存。液氮罐能够提供 - 196℃的超低温环境,使干细胞在这种极低温度下保持活性,细胞代谢活动几乎停止,从而实现干细胞的长期保存。

在整个干细胞储存过程中,每个环节都有严格的质量控制和记录,以确保干细胞的质量和安全性,为其未来的临床应用或科研使用提供可靠保障。